保存细菌等菌种最佳方法 菌种的保存方法
保存菌种的方法，应根据菌种的类型和保存目的进行选择，一般包括以下几种方法：
1、培养基保存法：此法不需要特殊设备，并可随时提供使用，为常用的一种保存方法，其缺点是易发生变异。营养要求
不高的细菌，可用半固体保存法，一般2～3月转种1次，并检查菌株特性，如特性已改变，则需丢弃。特殊培养要求的细菌，如流感嗜血杆菌可接种巧克力琼脂斜面，密封后冰箱贮存，每2周转种1次。淋病奈瑟菌保存于巧克力琼脂，每天或隔天转种1 次，不宜4 ℃冰箱保存，因易死亡。
2、快速冷冻法：将纯培养细菌在液体培养基上增菌后，取数个新鲜菌落加入含小牛血清或脱纤维绵羊血的培养基内制成浓菌悬液，再放人无菌玻璃珠，将此瓶放入－30℃以下低温冰箱保存。需要时用无菌镊子取出1 粒玻璃珠置增菌培养液中，增菌培养后即可获得新鲜菌种。用此方法，大部分细菌可保存6 ～12 月，甚至更长时间。
3、冷冻干燥法：是菌种保存最佳方法，可以免去细菌因频繁传代而造成菌种污染、变异和死亡。此法需冷冻干燥设备，操作较费时，但适用于需要长期保存的菌种。
菌种保存的方法有哪些，菌种传代操作规程
菌种保存的方法有斜面低温保藏法、液体石蜡覆盖保藏法、沙土保藏法、滤纸保藏法、甘油管保存法、冷冻干燥保存法。1、斜面低温保藏法:将菌种接种到适合的固体斜面培养基上，用油纸将棉塞部分包扎好，然后转移至2-8°C的冰箱中进行保存。2、液体石蜡覆盖保藏法:使用液体石蜡将斜面菌覆盖住，使其和空气隔绝。一、菌种保存的方法有哪些 1、斜面低温保藏法 (1)将菌种接种到适合的固体斜面培养基上，等到菌种充分生长过后，使用油纸将棉塞部分包扎好，然后转移至2-8°C的冰箱中进行保存。 (2)如果是霉菌、放线菌及有芽孢的细菌，一般可以保存2-4个月左右，需要移种一次。如果是酵母菌，一般可以保存2个月左右，需要每个月移种一次。 2、液体石蜡覆盖保藏法 (1)将液体石蜡装在三角烧瓶中，并使用棉塞塞好，用牛皮纸进行包扎，然后在0.1MPa，121.3°C的环境下灭菌30分钟左右，接着将其放置在40°C的温箱之中，将水汽蒸发掉。 (2)将需要保藏的菌种，用适合的斜面培养基进行培养，得到健壮的孢子或者是菌体。 (3)使用灭菌过的吸管将液体石蜡吸出，注入斜面上，用量为高出斜面顶端1cm左右为宜。 (4)将试管直立，放置在低温或者是室温之下进行保存。 (5)霉菌、放线菌、芽孢细菌可以保藏2年以上不死，酵母菌可以保藏1-2年，一般无芽孢细菌可以保藏1年，脑膜炎球菌可以保藏3个月左右(37°C环境下)。 3、沙土保藏法 (1)准备好河沙，加入10%稀盐酸，然后加热煮沸30分钟左右，将里面的有机质去掉，然后将酸水倒掉，用自来冲洗至ph为中性，接着烘干，过筛(40目筛子)，去掉粗颗粒。 (2)准备好非耕作层的不含腐植质的瘦黄土或红土，浸泡洗涤数次，直至ph为中性，然后烘干，碾碎，过筛(100目筛子)，去掉粗颗粒。 (3)将沙和土按照2:1的比例混合，装入试管或者是安瓿管中，塞好棉塞，在1212°C的环境下灭菌30分钟左右。 (4)将菌种在斜面培养基中培养，得到健壮的菌体，然后向斜面培养物中注入3-5ml无菌水，洗下细胞或孢子制成菌悬液。 (5)使用灭菌过的吸管吸取菌悬液，然后均匀滴入沙土管中(0.2-0.5ml/管)。如果是放线菌或霉菌，可以直接挑取孢子拌入沙土管中。 (6)真空抽去沙土管中的水分。 (7)将沙土管用火焰熔封，然后存放在低温(4-6°C)干燥处保藏，或者是将沙土管用牛皮纸或塑料纸包好，放置在干燥器内保存。保存期间，每隔6个月左右检查一次菌种存活性。 4、滤纸保藏法 (1)准备好滤纸条(0.5×1.2cm)，安瓿管(0.6×8cm)，然后每个安瓿管放置1-2张滤纸条，塞上棉塞，在0.1MPa，121°C的环境下灭菌30分钟左右。 (2)将菌种在适合的斜面培养基上培养，得到健壮的菌体。 (3)在灭菌培养皿中滴加1-2ml的灭菌脱脂牛乳，并取数环菌苔在牛乳内混合均匀，制成浓悬液，然后使用镊子从安瓿管中取出滤纸条，浸入菌悬液中，吸饱后，放回安瓿管中，塞上棉塞。 (4)将安瓿管放入干燥器中(内有五氧化二磷作吸水剂)，并用真空泵抽气至干。 (5)将棉花塞入管内，用火焰熔封，然后放置在低温环境下保存。 5、甘油管保存法 (1)准备好80%的甘油，然后进行高压蒸汽灭菌处理。 (2)将菌种在适合的斜面培养基上培养，并使用无菌水注入，制成成高浓度的菌悬液。 (3)取出1ml的甘油和菌液混合均匀，让甘油的浓度变为10-30%左右，然后放置在零下70°C的环境下进行保存。 6、冷冻干燥保存法 在低温下快速冻结细胞，然后在真空条件下进行干燥，让微生物的生长和酶活动停止，同时为了保证细胞在冷冻和水分升华的过程中不受损害，应当使用保护剂来制备细胞细胞悬液(菌在冻结和脱水过程中起到保护作用的溶质)，通过氢键和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。 二、菌种传代操作规程 1、点燃酒精灯，在火焰旁的上方灼烧接种环。 2、将原有的菌种斜面培养基(菌种管)和待接种的新斜面培养基(接种管)用左手的拇指、食指和中指夹住，菌种管在前，接种管在后，然后斜持试管(45°)，让试管内斜面向上，两个试管的口子平齐。 3、右手在火焰旁边转动两管的棉塞，然后右手拿着接种环的柄端，垂直将接种环在火焰上灼烧，顶端的环必须烧红，而且凡是接种时进入试管的部分，均应通过火焰灼烧。 4、使用右手的小指和手掌之间以及无名指和小指之间，将两管的棉塞拔出，拿住，然后将试管在火焰上通过。 5、将接种环插入菌种管内，接触无菌苔生长的培养基，待冷后，从斜面上挑取少许菌苔，然后迅速插入接种管，在斜面上轻轻划线接种(由下而上划直线，然后由下往上划曲线)。 6、接种完毕后，将管口通过火焰灭菌，并将棉塞塞上。
霉菌最适合的菌种保藏方法
1、斜面传代保藏法
此法是把菌种接种到所需要的斜面培养基上，在最适温度下培养，长出丰满的菌体细胞或孢子后，置于4℃冰箱或冷库保藏。此法方法简单，存活率高，适用于各类菌株的保藏。但保藏时间不长，需定期传代，传代过程中易退化污染，只适用于短期保藏。
2、甘油管冷冻保藏法
甘油管保藏法是将富集培养后的菌液与已灭好的甘油充分混合，使终浓度控制在20-30%之间，分装至甘油管中，最后置于-70℃冰箱或液氮罐保藏。此法相比斜面传代保藏时间更长，温度越低，保藏时间越久。
3、液体石蜡保藏法
液体石蜡保藏是在斜面培养或穿刺培养上加一层液体石蜡，液体石蜡可以防止失水干燥，隔绝空气，降低菌种细胞代谢速率。此法更适用于细菌和酵母菌。
4、沙土管保藏法
沙土管保藏法是把微生物附着在砂质载体上，目的是为了将微生物赖以生存的水分蒸发掉，使细胞处于休眠和代谢停滞状态，从而达到较长保藏的目的。此法适用于霉菌和放线菌。
5、真空冷冻干燥保藏法
该法集中了菌种保藏中低温、缺氧、干燥和添加保护剂等多种有利条件，使微生物的代谢处于相对静止状态。同时该法可用于细菌、放线菌、丝状真菌、酵母菌及病毒的保藏。因而具有保藏菌种范围广、时间长（10-20年）、存活率高等特点，是目前最有效的菌株保藏方法之一。【摘要】
霉菌最适合的菌种保藏方法【提问】
1、斜面传代保藏法
此法是把菌种接种到所需要的斜面培养基上，在最适温度下培养，长出丰满的菌体细胞或孢子后，置于4℃冰箱或冷库保藏。此法方法简单，存活率高，适用于各类菌株的保藏。但保藏时间不长，需定期传代，传代过程中易退化污染，只适用于短期保藏。
2、甘油管冷冻保藏法
甘油管保藏法是将富集培养后的菌液与已灭好的甘油充分混合，使终浓度控制在20-30%之间，分装至甘油管中，最后置于-70℃冰箱或液氮罐保藏。此法相比斜面传代保藏时间更长，温度越低，保藏时间越久。
3、液体石蜡保藏法
液体石蜡保藏是在斜面培养或穿刺培养上加一层液体石蜡，液体石蜡可以防止失水干燥，隔绝空气，降低菌种细胞代谢速率。此法更适用于细菌和酵母菌。
4、沙土管保藏法
沙土管保藏法是把微生物附着在砂质载体上，目的是为了将微生物赖以生存的水分蒸发掉，使细胞处于休眠和代谢停滞状态，从而达到较长保藏的目的。此法适用于霉菌和放线菌。
5、真空冷冻干燥保藏法
该法集中了菌种保藏中低温、缺氧、干燥和添加保护剂等多种有利条件，使微生物的代谢处于相对静止状态。同时该法可用于细菌、放线菌、丝状真菌、酵母菌及病毒的保藏。因而具有保藏菌种范围广、时间长（10-20年）、存活率高等特点，是目前最有效的菌株保藏方法之一。【回答】
目前菌种保藏的方法有很多种，其原理大多大同小异，主要采用一些物理或化学方法使微生物的生命活动处于半永久性的休眠状态，使微生物的新陈代谢作用限制在最低范围内。
菌种是国家的一种重要资源，保持优良菌种的优良性能，可保证高产稳产；在基础研究中，菌种保藏可保证研究结果获得良好的重复性。【回答】
沙土管保藏法适用于霉菌 沙土管保藏法是把微生物附着在砂质载体上，目的是为了将微生物赖以生存的水分蒸发掉，使细胞处于休眠和代谢停滞状态，从而达到较长保藏的目的。此法适用于霉菌和放线菌。【回答】
菌种保藏的常用方法及特点
（1）斜面低温保藏。是一种最常用、最简便的菌种保藏方法。首先将需要保藏的菌种接到斜面培养基上，在适宜的温度条下培养，当菌丝健壮地长满斜面时，即将此试管菌种取出，放置于4 ℃的冰箱中保藏。特点： ①简单易行，适用于各类菇类菌种保藏，是目前生产及科研普遍采用的一种方法；②保藏时间短，需6个月转接一次，转管次数多菌丝变异的可能性大；③如改用橡皮塞并用石蜡扣，可保藏1年～3年。 （2）液体石蜡保藏。液体石蜡保藏也称为矿油保藏，即用矿油覆盖试管斜面试管保藏的方法。矿油是指无色、透明、黏稠、性质稳定、不易被微生物分解的石蜡油和液体石蜡，将其覆盖在斜面菌种之上，可以隔绝空气，防治培养基水分蒸发，抑制微生物的代谢活动，推迟细胞老化，从而达到长期保藏菌种的目的。特点： ①方法简便易行，保藏条件不严格，保藏时间长，可作为长期保藏菌种的方法；②菌种必须垂直放，放置不方便。 （3）滤纸保藏。滤纸保藏是一种以无菌滤纸作为食用菌孢子吸附载体长期保藏菌种的方法，又称滤纸孢子保藏法。特点：技术要求高，设备费用大，菌种不易衰老退化，菌种保藏时间长很少变异。 （4）自然基质保藏。自然基质保藏就是以不含毒性、刺激性和抑菌性而富含营养的自然生长的基质作培养基来保藏菌种的方法。自然基质很多，食用菌常用的自然基质有发酵的粪草、木屑及枝条基质等，取材方便，制作方法简便，保藏时间也较长。使用时，只需取一块、一粒或一条培养物放在新鲜的培养基上，并在适温下培养即可。特点：方法简便易行，保藏时间长。